El glifosato se absorbe a través de las hojas y es transportado a los puntos de crecimiento de la planta donde inhibe una enzima necesaria para la síntesis de los aminoácidos esenciales tirosina, triptófano y fenilalanina. Esta enzima se encuentra sólo en las plantas y en alguno microorganismos, por lo que su efecto biocida directo no se cumple en los animales superiores. El glifosato se aplica por pulverización disuelto en agua (su solubilidad es de 12 g/l a temperatura ambiente). Los herbicidas usuales contienen sustancias que facilitan su aplicación mecanizada y se fabrican en concentraciones de 120, 240, 360, 480 y 680 g/l, siendo la más común la de 360. Las regulaciones europeas permiten aplicaciones para control de malezas que no excedan 12 litros de equivalente ácido de glifosato por hectárea; hay propuestas de limitar su uso en calles, veredas y jardines doméscticos por probables efectos tóxicos para las personas. Por su acción el glifosato es efectivo sólo para plantas en proceso activo de crecimiento, no como herbicida preventivo de la emergencia de malezas.
Hay informes crecientes del surgimiento de variedades de malezas resistentes al glifosato en todo el mundo. El efecto fue detectado a partir del año 2007 en Argentina. donde se han detectado 7 especies resistente, entre las que se cuentan 6 gramíneas que incluyen 2 variedades silvestres de raigrás, [http://es.wikipedia.org/wiki/Lolium_perenne ''Lolium perenne'' ] y [http://en.wikipedia.org/wiki/Lolium_multiflorum ''Lolium multiflorum''][http://www.unsam.edu.ar/tss/el-costo-del-glifosato/]. El tema está siendo estudiado por la Chacra Experimental Integrada Barrow del [[INTA]][http://inta.gob.ar/unidades/724000]. Está en proceso de elaboración un mapa de las especies resistentes al glifosato en diferentes regiones del país[http://www.puntal.com.ar/noticia_tra.php?id=115588].
En el año 2015 el problema de las malezas resistentes al glifosato, usual con todo tipo de herbicidas, se había intensificado, requiriendo monitoreo regulares de las plantaciones. Las principales malezas resistentes eran entonces el raigrás, el sorgo de Alepo y la rama negra.[http://www.clarin.com/rural/agricultura/malezas_resistentes-agricultura_0_1445855765.html] Según estimaciones de la Red de Médicos de Pueblos Fumigados[http://www.reduas.fcm.unc.edu.ar/wp-content/uploads/2011/04/primer-informe.pdf], en 2011 se usan usaban en el país unos 180 millones de litros anuales de glifosato.